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    合成培養基的主要成分淺析
    點(diǎn)擊次數:150 更新時(shí)間:2024-04-28

    合成培養基的主要成分有:氨基酸、碳水化合物、無(wú)機鹽、維生素及其它輔助物質(zhì)。

     

    1、氨基酸

     

    氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類(lèi)的細胞對氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,必須依靠培養液提供,這幾種氨基酸稱(chēng)為必需氨基酸。其中C5H10N2O3是細胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少C5H10N2O3時(shí),細胞生長(cháng)不良而死亡。因此,各種培養液中都有較大量的C5H10N2O3。但是,由于C5H10N2O3在溶液中很不穩定,應置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養液內。已含C5H10N2O3的培養液在4℃冰箱中儲存2 周以上時(shí),還應重新加入原來(lái)量的C5H10N2O3。

     

    2、碳水化合物

     

    碳水化合物是細胞生長(cháng)主要能量來(lái)源,其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。

     

    3、無(wú)機鹽

     

    培養液中無(wú)機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外,通過(guò)提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細胞調節細胞膜功能。培養液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素, 細胞通??赡褪?60mOsm/kg ~320 mOsm/kg。標準培養液的滲透壓在此范圍內波動(dòng)。特別注意:向培養液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì )明顯改變培養液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì)。向培養液中添加HEPES 時(shí)需按以下方法調節鈉離子濃度。

     

    4、緩沖系統

     

    大多數細胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是,細胞培養最適pH 值隨培養的細胞種類(lèi)不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。

    由于多數培養液靠NaHCO3與CO2 體系進(jìn)行緩沖,因此,氣相中的CO2 濃度應與培養液中NaHCO3濃度相平衡。如果氣相或培養箱空氣中CO2 濃度設定在5%,培養液中NaHCO3 的加入量為1.97g/L;如果CO2 濃度維持在10%,培養液中NaHCO3 的加入量為3.95g/L。

    細胞培養瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES 是一種非離子緩沖液,在pH 7.2 - 7.4 范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時(shí)對一些細胞可能有毒。HEPES 緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES 引起的滲透壓增加。在這種培養條件下,細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養液中含有酚紅作為pH 指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色。

     

    5、維生素

     

    在細胞培養中,盡管血清是維生素重要來(lái)源, 但是許多培養基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長(cháng)。

     

    6、其它成分

     

    在一些較為復雜的培養液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM 培養液,使用時(shí)還需要補加丙酮酸鈉和2-C2H6OS2-Mercaptoethanol,2-Me)。2-Me 對細胞生長(cháng)有很重要的作用。有人認為它相當于胎牛血清,有直接刺激細胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氫基,其中一個(gè)重要作用是使血清中含硫的化合物還原成gu 胱甘肽,能誘導細胞的增殖,為非特異性的激活作用。同時(shí)避免過(guò)氧化物對培養細胞的損害。另一個(gè)重要作用是促進(jìn)分裂原的反應和DNA 合成,增加植物凝集素(PHA)對淋巴細胞的轉化作用,已廣泛應用于雜交瘤技術(shù),另外,也開(kāi)始用于一些難以培養的細胞。2-Me 是一種小分子還原劑,極易氧化。分子量為78.13,純的2-Me 是一種無(wú)色有刺激味的液體,比重為1.110-1.120(Do20),常用終濃度為5×10-5M。常配制成0.1M 的儲存液,用時(shí)每升培養液加0.5ml。

     

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