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    放線(xiàn)菌屬通用探針?lè )晒舛縋CR試劑盒
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    產(chǎn)品型號:
    50T
    產(chǎn)品報價(jià):
    產(chǎn)品特點(diǎn):
    放線(xiàn)菌屬通用探針?lè )晒舛縋CR試劑盒調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
      50T放線(xiàn)菌屬通用探針?lè )晒舛縋CR試劑盒的詳細資料:

    特點(diǎn):
    1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
    2. 根據放線(xiàn)菌屬通用保守序列設計的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應。
    3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
    4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續污染。
    5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
    6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
    儲存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    放線(xiàn)菌屬通用探針?lè )晒舛縋CR試劑盒

    英文名稱(chēng) Actinomyces spp.
    貨號 BJ-R6344

    使用方法:
    一、樣品采集:
    1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進(jìn)行。
    2、血液樣品:用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
    3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
    4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
    一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
    1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對照。
    2. 標記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
    3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
    4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
    5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用
    6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
    7. 重復上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。放冰上待用。

    原理:
    所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
    檢測方法
    1.SYBRGreenⅠ法:
    在PCR反應體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì )發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
    SYBR定量PCR擴增熒光曲線(xiàn)圖
    PCR產(chǎn)物熔解曲線(xiàn)圖
    2.TaqMan探針?lè )ǎ?br />探針完整時(shí),報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

    細胞培養病毒污染溶斑法中性紅染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:20次

    細胞丙二醛(MDA)比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:50次

    組織可溶性總蛋白制備試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:20次

    細胞/組織線(xiàn)粒體DNA萃取試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:10次

    血清/血漿總膽汁酸酶連續循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:20次

    生物素核酸蛋白結合凝膠遷移電泳分析(EMSA)試劑盒(包括標記探針) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:10次

    人體PARP-1(Sf21重組) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:5單位

    組織乙酰輔酶A膽固醇乙酰轉移酶(ACAT)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:20次

    生物素化學(xué)底物復合試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:5次

    Ral鳥(niǎo)苷酸酶活性分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:6次

    真菌格蘭-韋革氏(Gram-Weigert)染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:50次

    析法大量蛋白濃縮沉淀試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規格:5/10次

    放線(xiàn)菌屬通用探針?lè )晒舛縋CR試劑盒格隆銨 含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    甘羅銨 含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    谷氨酸 鑒別 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 50mg

    磺噁唑   含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    磺嘧啶  含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    炔諾孕酮 含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    巰 含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    氧芐啶 含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    羥孕酮  進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 50mg

    烯雌酚 含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 1mg

    枸櫞酸氯米芬 含量測定 進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格:  1mg 

    雙麥角毒堿  進(jìn)口/國產(chǎn) 常溫,避光 規格: 50mg

    實(shí)驗過(guò)程:
    一、試劑準備
    1. DNA模板
    2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
    3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
    4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    三、注意事項
    1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
    2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
    3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
    4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
    6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。

    產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 放線(xiàn)菌屬通用 探針?lè )?/a> 熒光定量PCR試劑盒
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