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    鷓鴣源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒
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    產(chǎn)品型號:
    50T
    產(chǎn)品報價(jià):
    產(chǎn)品特點(diǎn):
    鷓鴣源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
      50T鷓鴣源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒的詳細資料:

    產(chǎn)品特點(diǎn):
    1. 鷓鴣源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
    2. 反應緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘;
    3. 抗干擾能力強,反應重復性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來(lái)源的復雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
    在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
     特異性熒光標記:
     TaqMan法
     TaqMan探針的特性:
    (1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
    (2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
    (3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無(wú)熒光, R與Q分開(kāi),發(fā)熒光
    (4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
    相對定量通過(guò)內標定量:
    內標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。

    儲存條件:
    僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
    3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    鷓鴣源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒

    英文名稱(chēng) 
    貨號

    BJ-R7444

    檢測步驟:
    一、 試劑的準備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
    試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
    熒光PCR反應液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    (1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
    7.2 qPCR反應條件
    將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
    推薦循環(huán)條件:
    1循環(huán) 50℃ for 2 min
    預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
    PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

    實(shí)驗方法步驟:
    方法
    1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。     
    10×PCR buffer                   
    5 μl     dNTP mix (2mM)             
    4 μl     引物1(10pM)                 
    2 μl     引物2(10pM)                 
    2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
    1 μl      加ddH2O至 50 μl  
    視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
    3:結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
    4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    PCR實(shí)驗步驟
    典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應,使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
    將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
    人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合,兩個(gè)引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長(cháng)短;
    耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
    以下是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品:

    結晶紫英文名稱(chēng):Crystal violet分子式:407.98分子量: C25H30N3Cl:548-62-9

    土木香內酯英文名稱(chēng):Civil Engineering分子式:232.3181分子量:C15H20O2:546-43-0

    重鉻酸鉀分子式:294.18英文名稱(chēng):Potassium dichromate:7778-50-9分子量: K2Cr2O7

    三乙硼四氫呋溶分子式:97.99英文名稱(chēng):Three ethyl boron solution in tetrahydrofuran:97-94-9分子量: C6H15B

    2-溴-1,10-菲羅啉分子式:259.1英文名稱(chēng):2- br -1,10-:22426-14-8分子量: C12H7BrN2

    酸四咪唑分子式:240.75英文名稱(chēng):Hydrochloric acid four:5086-74-8分子量: C11H13ClN2S

    2-溴-3-吡分子式:173.01英文名稱(chēng):2- -3- amino pyridine:39856-58-1分子量: C5H5BrN2

    鉀分子式:138.55英文名稱(chēng):Potassium perchlorate:7778-74-7分子量: KClO4

    維庫溴銨英文名稱(chēng):Vecuronium分子式:637.73分子量: C34H57BrN2O4:50700-72-6

    5,5'-二溴-2,2'-聯(lián)吡分子式:313.98英文名稱(chēng):5,5'- dibromo -2,2'- bipyridine:15862-18-7分子量: C10H6Br2N2

    5-氟-8-羥喹啉分子式:163.15英文名稱(chēng):5- -8- hydroxy group:387-97-3分子量: C9H6FNO

    鷓鴣源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaePC-3M-IE8(人前列腺高轉移細胞株)

    著(zhù)絲粒蛋白B(CENPB)重組蛋白英文名稱(chēng):Recombinant Centromere Protein B (CENPB)

    小鼠腎小球內皮細胞*培養基100mL

    釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaePC-3M(人前列腺細胞)

    VE(人血管內皮細胞)5×106cells/瓶×2

    HtrA絲氨酸肽酶4(HTRA4)重組蛋白英文名稱(chēng):Recombinant HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)

    金龜子綠僵菌 Metarhizium anisopliae苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti

    Poly-L-Lysine Solutiona(5mg/ml)規格:1mlgersion

    吳茱萸次堿規格: 20mg/支;98%

    PALCAM瓊脂基礎 規格: 250g 用途: 用于單增李斯特氏菌的選擇性分離培養(GB 4789.30-2010和SN/T0184-2005)。

    中間葡萄球菌 Staphylococcus intermedius狀絲孢酵母 Trichosporon capitatum

     

    產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 鷓鴣源性成分 探針?lè )?/a> 熒光定量PCR試劑盒
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