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    榛子源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒
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    產(chǎn)品型號:
    50T
    產(chǎn)品報價(jià):
    產(chǎn)品特點(diǎn):
    榛子源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒全新的熱啟動(dòng)DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應的過(guò)程中抑制非特異擴增,從而大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應的特異性。
      50T榛子源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒的詳細資料:

    實(shí)驗方法步驟:
    方法
    1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。     
    10×PCR buffer                   
    5 μl     dNTP mix (2mM)             
    4 μl     引物1(10pM)                 
    2 μl     引物2(10pM)                 
    2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
    1 μl      加ddH2O至 50 μl  
    視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
    3:結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
    4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    PCR實(shí)驗步驟
    典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應,使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
    將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
    人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合,兩個(gè)引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長(cháng)短;
    耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。

    儲存條件:
    僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
    3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    榛子源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒

    英文名稱(chēng) 
    貨號

    BJ-R7445

    產(chǎn)品特點(diǎn):
    1. 榛子源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
    2. 反應緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘;
    3. 抗干擾能力強,反應重復性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來(lái)源的復雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
    在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
     特異性熒光標記:
     TaqMan法
     TaqMan探針的特性:
    (1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
    (2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
    (3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無(wú)熒光, R與Q分開(kāi),發(fā)熒光
    (4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
    相對定量通過(guò)內標定量:
    內標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。
    檢測步驟:
    一、 試劑的準備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
    試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
    熒光PCR反應液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    (1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
    7.2 qPCR反應條件
    將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
    推薦循環(huán)條件:
    1循環(huán) 50℃ for 2 min
    預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
    PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

    以下是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品:

    2-氯-3,5-二硝三氟甲分子式:270.55英文名稱(chēng):2- -3,5- two nitro three f:392-95-0分子量: C7H2ClF3N2O4

    間氟吡分子式:97.09英文名稱(chēng):Fluorine pyridine:372-47-4分子量: C5H4FN

    5-喹啉分子式:144.17英文名稱(chēng):5- amino group:611-34-7分子量: C9H8N2

    二環(huán)丙酮英文名稱(chēng):Two phenyl ring分子式:206.24分子量: C15H10O:886-38-4

    乙龍腦酯英文名稱(chēng):Bornyl acetate分子式:196.29分子量:C12H20O2:20347-65-3

    玫瑰紅鈉英文名稱(chēng):Rose red分子式:214.04分子量: C6Na2O6:523-21-7

    豆素498英文名稱(chēng):498分子式:319.38分子量: C16H17NO4S:87331-48-4

    1,3-二亞胺異吲哚分子式:145.17英文名稱(chēng):1,3- two - based:57500-34-2分子量: C8H7N3

    腈英文名稱(chēng):Benzene acetonitrile分子式:117.15分子量: C8H7N:140-29-4

    重氮胺分子式:197.24英文名稱(chēng):Heavy nitrogen amino group:136-35-6分子量: C12H11N3

    1,2,3-*氧分子式:168.19英文名稱(chēng):1,2,3- grade three:634-36-6分子量: C9H12O3

    榛子源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒小鼠Ⅱ型肺泡上細胞*培養基100mL

    人甲狀腺濾泡上皮細胞*培養基100mL

    結腸英文名稱(chēng):C26瘤

    293ET(人胚腎細胞(SV40T和EBNA1基因修飾細胞))豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium vigna

    布氏菌選擇性培養基/Brucella Selective Medium布氏菌的選擇性分離培養250克國產(chǎn)/進(jìn)口

    小鼠白血病細胞英文名稱(chēng):M1

    盤(pán)孢菌 Gloeosporium sp.Yeast Protein Extraction Reagent/酵母蛋白抽提試劑

    小鼠肝外膽管上皮細胞*培養基苜蓿中華瘤菌

    小鼠結締組織纖維細胞香菇 Lentinula edodes

    BRL-3A(大鼠正常肝細胞)5×106cells/瓶×2

    MKTTN肉湯/MKTTN Broth食品中沙門(mén)氏菌檢驗選擇性增菌250克國產(chǎn)/進(jìn)口

     

    產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 榛子源性成分 探針?lè )?/a> 熒光定量PCR試劑盒
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